2. Major Cell Culture Contaminant
▶ 4. 오염관리의 기본전략
- Detecting Mycoplasma in Culture
5. Mycoplasma Prevention: 항생제 사용의 딜레마
6. Products
4. 오염관리의 기본전략
▶ Detecting Mycoplasma in Culture
Mycoplasma를 검출하는 것은 쉽지 않은 일입니다. 이 때문에 오염의 심각성에 대한 인식을 갖지 않는 이상 연구자들은 정기적으로 배양 세포를 테스트하는 것에 크게 신경 쓰지 않으며 이러한 태도가 실험실이 쉽게 오염에 노출되기 쉬운 환경을 만듭니다. Mycoplasma를 검출하는 것은 크게 두 가지로 나누어집니다.
배지에서 직접 배양 후 현미경 등으로 확인하는 방법과 Mycoplasma의 독특한 특성을 이용하는 간접 검출법이 있습니다. 직접 배양법은 가장 전통적이면서 정확한 방법이지만 매우 어렵고 시간이 걸리는 작업으로 최대 4주가 소요되기도 하는데 그럼에도 불구하고 몇몇 변종에 대해서는 효과적이지 못합니다. 이 방법은 긴 검사 과정 동안 오히려 배양 중인 Mycoplasma가 오염원이 되어 실험실에 번져나갈 위험성도 있기 때문에 전문 수탁기관의 숙련된 검사원에게 의뢰하는 것이 좋습니다. 간접 검사법은 매우 다양하게 개발되어 왔습니다. 이들은 PCR 기반의 검사, 형광 염색, 동위원소 사용 및 면역 측정법이 있습니다. 대부분 직접 배양법에 비해 빠르고 간편하며 상용화된 제품들도 쉽게 구할 수 있습니다. 하지만 직접 배양법에 비해 감도가 낮아 오염도가 심각한 경우에만 검출이 되는 것이 일반적이며 따라서 위음성의 가능성도 매우 큽니다.
가장 권장되는 간접 측정법은 DNA Fluorochrome Staining으로 형광염료를 사용하여 Mycoplasma의 DNA를 염색하고 이를 형광 현미경 하에서 관찰하는 방법입니다. 이 방법은 Mycoplasma외에 부가적으로 다른 Bacteria의 오염도 검출할 수 있는 장점도 가집니다. 가장 좋은 접근 방식은 두 방법의 조합으로 직접 배양법은 높은 감도를 제공하고 DNA 형광 염색은 직접 배양법이 놓치기 쉬운 까다로운 Mycoplasma를 검출할 수 있습니다. FDA와 USDA는 단일 클론 항체, 백신 및 약물과 같은 배양 유래 제품 및 이의 생산에 필요한 세포 등 배양세포에서 유래된 제품에 대해 이 접근방식을 적용할 것을 요구합니다.
